作者：王礼宁1马勇1,2郑苏阳1郭杨1潘娅岚1王磊1顾鸣1孙杰1

单位：

1、南京中医药大学骨伤研究所骨伤修复与重建新技术实验室

2、南医院骨伤科

摘要：目的研究蛇床子素(osthole,OST)对破骨细胞形成和骨吸收的影响，并初步分析其分子机制。方法体外构建破骨细胞诱导培养体系，通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrateresistantacidphosphatase,TRAP)法、骨吸收陷窝扫描电镜观察鉴定成熟破骨细胞，采用CCK-8(cellcountingkit-8)法筛选无细胞毒性的药物浓度组，使用细胞骨架荧光染色法观察OST对其形态的影响。使用骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色进行面积定量分析，并统计吖啶橙荧光染色后凋亡破骨细胞的比例，采用荧光定量PCR法测定OST对NFATc1等相关破骨基因表达的影响。结果体外成功构建破骨细胞培养体系，通过CCK-8法筛选出10-6、10-5mol/L两组药物浓度。OST可使破骨细胞肌动蛋白环变细，伪足和褶皱区消失。OST0、10-6、10-5mol/L组TRAP染色阳性数目分别为.6±4.5、80.4±3.7、58.2±3.1，融合指数分别为(44.3±3.3)%、(20.3±0.9)%、(12.6±0.6)%，各浓度组组间比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)；该3组诱导的破骨细胞产生的骨陷窝数目为41.67±1.16、34.01±2.65、26.33±4.16，骨陷窝面积(μm2/片)分别为.0±.0、.8±.0、649.1±.0，各浓度组组间比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)；该三组破骨细胞凋亡率分别为：26.3%、30.1%、37.2%，OST组凋亡率较对照组明显升高，且差异有统计学意义(P＜0.05)，但两浓度组之间差异无统计学意义(P＞0.05)。RANKL诱导后NFATc1、CTSK、MMP-9、TRAP、INTE-BETA3、C-SRC的mRNA表达量分别为空白组的2.±0.、30.5±1.、43.54±2.、9.±0.、6.±0.、4.±0.倍，与空白组相比表达量均明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.01);OST干预后，各组表达量均受到明显抑制，OST组表达量与RANKL对照组相比差异也均具有统计学意义(P＜0.05)。除了NFATc1外，两浓度组组间比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论OST可以通过调控NFATc1等破骨基因表达抑制破骨细胞的分化。

关键词：蛇床子素；破骨细胞；NFATc1；骨质疏松

蛇床子素(osthole，OST)，是中药蛇床子中一种主要的活性成分。现代药理学研究发现其具有抗炎解痉、抗心律失常、抗肿瘤、抗过敏和增强免疫功能等作用。近年，人们发现其在防治骨质疏松症上也具有一定的作用。鲍君杰等发现蛇床子素能明显改善去卵巢大鼠骨质疏松模型中的股骨骨密度和降钙素(calcitonin,CT)、骨钙素(boneglaprotein,BGP)、雌二醇(estradiol,E2)等血清生物化学指标。明磊国等发现10-5mol/L的OST可提高成骨细胞中相关成骨基因的表达，促进钙盐沉积和骨钙素的分泌，从而增强成骨活动。

骨稳态作为一个复杂的生理过程，主要由成骨细胞介导的骨形成和破骨细胞介导的骨吸收所构成。OST抗骨质疏松的研究目前多集中在动物体内实验和对体外培养成骨细胞的作用，而其对破骨细胞的







































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